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組
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培
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污
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染
如何降低植物組培的污染率 在組培技術日趨成熟的今天,越來越多的公司、企業(yè)甚至個人選擇利用組培技術進行生產化育苗,但在組織培養(yǎng)中通常會出現(xiàn)不同程度的污染。污染不僅會對植株造成傷害,增加接種源及污染的機率,而且會造成很大的經(jīng)濟損失。因此,在市場競爭中,如何降低組織培養(yǎng)的污染率是工廠化生產不可忽視的技術環(huán)節(jié)。 首先,讓我們來了解一下污染的來源。植物組織培養(yǎng)污染主要是由霉菌、細菌和酵母菌引起的污染。霉菌和酵母菌在培養(yǎng)條件下生長快,容易觀察到,而細菌潛伏期長,植物組織一般不表現(xiàn)癥狀,所以很難在前期用肉眼觀察到。細菌污染的來源主要有:材料內部滅菌處理不好、內生菌的存在、寄生植物的污染。有些植物的昆蟲和螨蟲的體表帶有霉菌的孢子和細菌,在九、十月份是重要的污染源,因多種植物昆蟲處在大量繁殖階段,此時大量昆蟲造成的污染源最易造成組培污染的嚴重發(fā)生。另外,隨著植物材料年齡的增長,植物材料的健康狀況不斷惡化,組培污染也更加嚴重;其次環(huán)境條件和操作過程也是引起污染的主要原因。 木木組培根據(jù)多年的從業(yè)經(jīng)驗,針對“如何有效降低植物組織培養(yǎng)的污染率”為題,與組培好友共同分享與探討。 01 整個組培室的規(guī)劃設計要合理。 有菌區(qū)和無菌區(qū)要進行嚴格的區(qū)域劃分隔離,減少非必要的進出通道,控制污染源;如果培養(yǎng)室面積過大,要分割成若干面積較小的獨立的培養(yǎng)室,這樣一旦發(fā)生污染,可以形成有效的控制范圍,減少損失;在接種室和培養(yǎng)室要設置一定面積的緩沖間,并且原則上緩沖間的門和功能室的門盡量避免在同一個方向。 02 配備一定數(shù)量的滅菌設備并定期檢查。 按生產環(huán)節(jié)來說,配置培養(yǎng)基的水要保證是無菌的蒸餾水;進行培養(yǎng)基滅菌時要保證滅菌溫度和壓力,尤其注意當滅菌鍋達到規(guī)定的溫度和壓力之后要保證滅菌時間;接種室的超凈工作臺的初效過濾網(wǎng)要及時清洗,要定期檢查超凈工作臺的高效過濾器的濾膜是否需要更換,接種過程中要對接種工具進行消毒避免交叉感染;接種室和培養(yǎng)室都要配備一定的滅菌設備定期進行室內環(huán)境的整體消毒殺菌,最大限度確保無菌區(qū)的潔凈程度符合生產要求。 03 制定科學合理的組培室無菌操作規(guī)程。 在無菌操作過程中,工作人員嚴格按照無菌操作的要求,規(guī)范熟練地完成好每一個步驟,能有效地減少由操作引起的污染。具體要求如下: 一、接種前,工作人員的雙手必須用肥皂水洗凈,進入接種室后換上工作服、戴上口罩,用75%的酒精擦拭消毒雙手; 二、用75%的酒精擦拭超凈工作臺,接種工具(如剪刀、手術刀、鑷子等)使用前要在75%酒精中浸泡,再在火焰上灼燒,冷卻后使用; 三、在超凈工作臺上正確擺放接種用具、培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基,臺面上的東西不能堆放太多,以免影響氣流; 四、接種過程中應避免他人來回走動,操作人員禁止談話,并盡量避免操作人員頭部伸入超凈工作臺的工作區(qū)內; 五、培養(yǎng)瓶的開啟、接種材料的切割、分裝、封口等步驟要規(guī)范熟練,避免交叉污染; 六、每切割、轉接完一瓶母種材料后,要及時更換無菌紙,重新更換所用的接種工具,最好備兩套交替使用。 04 其他注意事項: 一、配備相應的化學試劑進行必要處理。在生產過程中,如有必要,可在培養(yǎng)基中加入適量的抑菌劑以控制污染。 二、在繼代培養(yǎng)時一定要仔細檢查,避免對污染的材料進行擴大增殖。 三、定時對培養(yǎng)基進行觀察,出現(xiàn)污染狀況要進行及時清理。
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